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人絨毛膜促性腺激素HCG的檢查方法

更新時間:2020-04-20 09:32:43  推薦指數(shù):

  成熟女性因受精的卵子移動到子宮腔內(nèi)著床后,形成胚胎,在發(fā)育成長為胎兒過程中,胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1-2.5時,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8郛周達(dá)到高峰,至郛期第4個月始降至中等水平,并一直維持到妊娠末期。

  HCG是由兩個非共價鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個亞基不具有生物活性,當(dāng)連接成完整化合物時始具活性,分子量約為 4.7萬。其主要功能就是刺激黃體,有利于雌激素和黃體酮持續(xù)分泌,以促進了宮蛻膜的形成,使胎盤生長成熟。HCGα亞單位的氨基酸排列與黃體生長激素(LH)α亞單位相似,故用完整的抗HCG分子的抗體測定HCG時與LH間有免疫交*反應(yīng)。但它們的β亞單位各不相同。因此為避免交*反應(yīng),目前均采用高將近的抗β-HCG單克隆抗體進持特異的HCG檢查,近年來還有報道采用抗β- HCG羧基末端肽單克隆抗體以進一步提高檢測的敏感性和特異性。

  一、膠乳凝集抑制試驗和血凝抑制試驗

  1960年Wide及Gemzell開始采用膠乳凝集抑制試驗(latex agglutination inhibitiontest,LAIT)技術(shù)測定尿中HCG,即將尿液與抗 HCG血清作用后,加入已吸附抗原的膠乳,如尿中含HCG較多,則先與抗 HCG結(jié)合,不再有多余的抗 HCG與膠乳產(chǎn)生凝集而仍呈均勻的乳膠狀,是為陽性。相反,不含HCG尿不與抗血清作用,當(dāng)加入吸附抗原的膠乳后,抗血清可與膠乳抗原反應(yīng),出現(xiàn)明顯的“特”特性凝集顆粒,即為陰性。也可利用血細(xì)胞的血凝抑制試驗(hemoagglutination inhibition test,HAIT),其原理與膠乳法一致只是載體由膠乳改成羊紅細(xì)胞。這兩種試驗方便簡便,靈敏度為100-500Mu/ML ,適合大批標(biāo)本檢查,但因特異性差,不能定量,已逐漸被單克隆抗體法所取代。

  二、放射免疫試驗(RIA)

  利用放射標(biāo)記的HCG與被檢測尿中的HCG競爭性地結(jié)合抗-HCG抗體,當(dāng)被檢尿中HCG增加時,結(jié)合物的放射性減低,與不同含量標(biāo)準(zhǔn)品對比可測尿中HCG的含量。使定量檢測成為可能。

  由于RIA需一定設(shè)備,試驗手續(xù)繁甭,且有核素污染問題,不適用于臨床常規(guī)應(yīng)用。

  三、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

  該方法目前已廣泛應(yīng)用于臨床,其基本原理是運用夾心免疫酶分析技術(shù)。即采用HCG單克隆抗體包被于固相表面,樣品中的HCG 都將與支持物表面的抗體相結(jié)合。與樣品一孵育后,沖洗耳恭聽表面,然后加入特異性酶標(biāo)抗β-HCG亞基的單克隆抗體,最后加入酶作用的基質(zhì),即產(chǎn)生顏色。該法可目測,靈感度為20-50Mu/ml,采用抗β-HCG單克隆抗體二點酶免疫法進行定量,靈敏度可達(dá)2-10mU/ml。目前免疫酶法進一步發(fā)展為更簡便、適于病人自檢的一步法,即免疫酶滲透試驗。

  四、單克隆抗體膠體金試驗

  免疫膠體金法是將羊抗人HCG抗血清(多抗)、羊鼠IGG分別固定特制的纖維素試帶上并呈兩條線上下排列,羊抗鼠IGG線在試帶知上方為陰性對照,羊抗人HCG多抗在下方為測定。試帶條中含均勻分布的膠體金標(biāo)記鼠抗人β-HCG單克隆抗體和無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG。檢測時將試帶浸入被檢尿液中(液面低于固定的兩條抗體線)后迅速取出。尿液沿試帶上行,尿中的β-HCG在上行過程中與膠體金標(biāo)記單克隆抗體結(jié)合,待行至羊抗人HCG抗體線時,形成金標(biāo)記的β-HCG單元抗尿HCG羊抗人HCG復(fù)合物而在試帶上呈茲紅色區(qū)帶,為HCG陽性反應(yīng),試帶上無關(guān)的金標(biāo)記鼠IGG隨尿液繼續(xù)上行至羊抗鼠IGG處時與之形成紫紅色的金標(biāo)記的抗原體復(fù)合物是為陰性對照。判斷結(jié)果時,含HCG的尿液試帶可顯示上、下兩條紫紅色線條,而陰性標(biāo)本則只顯出上邊一條紫紅色線。

  [方法學(xué)評價] 縱觀HCG檢查方法,有生物激動、化學(xué)法、免疫法等。幾種不同的HCG檢查方法比較見表9-1。免疫法的檢測手段不斷更新、向特異簡便、快速、普及方向發(fā)展,現(xiàn)已有膠乳或血凝抑制試劑、放射免疫、酶免疫、膠體金紙片法等。除診斷早期妊娠早孕釘,HCG檢查對病理妊娠職宮外孕及胎盤滋養(yǎng)層疾病的診斷、鑒別、治療及追蹤觀察等均有意義。

HCG檢測試劑盒
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